產品簡介

NAD激酶(NADK)測試盒微量法的相關產品：單寧酶(TAN)測試盒微量法單寧酶(TAN)測試盒紫外分光光度法單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒微量法蛋白質羰基測試盒微量法蛋白質羰基測試盒紫外分光光度法淀粉分支酶(SBE)測試盒微量法

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

商品屬性：

測定意義：

NADK（EC 2.7.1.23）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是目前所發現的生物體內惟一能夠催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶，可催化NAD(H)以ATP或無機多聚磷酸[poly(P)]作為磷酰基供體進行磷酸化反應，生成NADP(H)。因此，NAD激酶在合成NADP(H)以及調節NAD(H)與NADP(H)的平衡上具有重要作用。
測定原理：
NADK催化NAD+磷酸化，生成NADP+；NADP+可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH；NADPH通過PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍（MTT），通過在600 nm下測定MTT的還原速度（吸光值的變化）可反映出NADK活性的大小。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 10 mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 25 mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：粉劑×1 瓶，-20 ℃保存；

試劑四：粉劑×1 瓶，-20℃保存；

組織樣本的前處理：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量

（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 340nm，蒸餾水調零。

2、將試劑一和試劑二 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 15min 以上。

3、工作液Ⅰ的配制：在試劑三中加入 5mL 試劑一，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；

 工作液Ⅱ的配制：在試劑四中加入 18mL 試劑二，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后

-20℃保存，禁止反復凍融；

4、加樣表

試劑名稱(μL) 測定孔 對照管

樣本 20 20

工作液Ⅰ 80

試劑一 80

充分混勻，37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 15min，立即煮沸2min（蓋緊，防止水分散失）冰浴冷卻，10000g，25℃離心 10min，取上清

上清液 40 40

工作液Ⅱ 160 160

加完試劑混勻，室溫靜置 15min，340nm 下測定吸光值，ΔA=A 測定-A 對照。

NADK 活性計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清（漿）NADK 活力的計算:

單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘生成 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。

NADK（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=53.59×ΔA

2、組織、細菌或細胞中 NADK 活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADP 定義為一個酶活力單位。

NADK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=53.59×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘生成 1 nmol NADP 定義為一個酶活力單位。

NADK（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=53.59×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘生成 1 nmol NADP 定義為一個酶活力單位。

NADK（nmol/min /104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=0.107×ΔA

V 反總：反應體系總體積，1×10-4

L；ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×103L / mol /cm；d：

比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.02 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：

反應時間，15 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞

總數，500 萬。

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

1、血清（漿）NADK 活力的計算:

單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘生成 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。

NADK（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=107.18×ΔA

2、組織、細菌或細胞中 NADK 活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADP 定義為一個酶活力單位。

NADK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=107.18×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘生成 1 nmol NADP 定義為一個酶活力單位。

NADK（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=107.18×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘生成 1 nmol NADP 定義為一個酶活力單位。

NADK（nmol/min /104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=0.214×ΔA

V 反總：反應體系總體積，1×10-4

L；ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×103

L / mol /cm；d：

96 孔板光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.02 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：

反應時間，15 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞

總數，500 萬。

生化檢測試劑盒實驗操作說明：

一、抗氧化系列生化檢測試劑盒

包括氧化酶（XO）活性分析、超氧陰離子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性（GOD）檢測、總抗氧化能力（TAC）檢測、植物原花青素(OPC)含量檢測、植物類黃酮含量檢測、植物總酚（TP）含量檢測試劑盒。

氧化酶（XO）活性分析試劑盒為例，提供了一種簡單易用的比色分析法，用于測定各種樣品中的XO活性，特點是測定血清，血漿，組織/細胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性，以及廣泛的檢測范圍：15.6 -500 mU/mL。

二、氧化系列生化檢測試劑盒

包括過氧化氫酶 (CAT) 活性分析、過氧化氫（H2O2）檢測、脂質過氧化(丙二醛) 分析、蛋白質羰基含量檢測、超氧陰離子含量檢測等試劑盒。

蛋白質羰基含量檢測試劑盒（比色法）為例，提供了一種簡單易用的比色法，用于分析不同生物樣品（細胞/組織裂解液，生物液體）中蛋白質羰基含量。在370 nm處有特征吸收峰。

特點是：1.測定組織樣本、細胞、細菌、血清等中的蛋白質羰基含量。2.樣本處理、實驗步驟以及結果計算更加詳盡準確精煉。3.保質期長。

三、抗逆系列生化檢測試劑盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測、羥自由基清除能力分析、多酚氧化酶（PPO）活性檢測、過氧化物酶(POD)活性檢測等試劑盒。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測試劑盒為例，提供一種簡單易用的比色測定法，用于定量測定血清，血漿，組織/細胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性。

特點是：1.測定血清，血漿，組織/細胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性。2.通過WST-8法測定SOD活性，zui大抑制率可接近100％，不受一些常見干擾因素的干擾。3.廣泛的檢測范圍：3.13- 200U/mL。

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