小谷氨酰胺三角四肽重復(fù)區(qū)蛋白α抗體的生wu素化標(biāo)記實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)

小谷氨酰胺三角四肽重復(fù)區(qū)蛋白α抗體的生wu素化標(biāo)記實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：

1.如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標(biāo)記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析；

2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當(dāng)則影響標(biāo)記的效率,應(yīng)先用幾個(gè)不同的分子比來篩選最適條件；

3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點(diǎn)可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活；

4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時(shí)可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等；

5.當(dāng)游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)時(shí),或位于酶的催化位點(diǎn)時(shí),生物素化會降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性；

6.生物素還可能與不同的功能基團(tuán),如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價(jià)結(jié)合；

7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生物素會對生物素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競爭作用；

8.在細(xì)胞的熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細(xì)胞可導(dǎo)致高本底。

Phospho-Ack1 (Tyr284)磷酸化Ack1抗體

Phospho-Ack1 (Tyr326)磷酸化Ack1抗體

Phospho-beta-Arrestin 1 (Ser412)磷酸化β抑制蛋白1抗體

Phospho-Aurora A (Thr288)磷酸化有絲分裂激酶A抗體

phospho-APS(Ser598)磷酸化APS抗體

Aurora A有絲分裂激酶A抗體

AIM2干擾素誘導(dǎo)蛋白AIM2抗體

Aquaporine 2水通道蛋白-2抗體

ABI2腫瘤抑制基因ABI2/精氨酸酪氨酸蛋白激酶結(jié)合蛋白抗體

ARL11ADP核糖基化因子樣11抗體

ARMCX3ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX3抗體

ARMCX1ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX1抗體

ARMCX2ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX2抗體

Apg10自噬相關(guān)蛋白10抗體

Aminoacylase 1氨基酰化酶1抗體

Adipose Triglyceride Lipase脂肪甘油三酯脂酶抗體

phospho-AMPK alpha-1 (Thr172)磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體

Amphiregulin雙調(diào)蛋白（結(jié)腸直腸細(xì)胞源性生長因子）抗體

phospho-AQP2(Ser264)磷酸化水通道蛋白2抗體

AXL粘附相關(guān)激酶抗體

phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703)磷酸化粘附相關(guān)激酶抗體

phospho-AKT1 + AKT2 + AKT3 (Thr308+Thr309+Thr305)磷酸化蛋白激酶B抗體